上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬偽狂犬病PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。

產(chǎn)品詳細(xì)信息

【用途】  用于豬偽狂犬病的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【操作步驟】

1. 病料處理

   取適量病料大腦、扁桃體、肺臟等組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS液按照1：3稀釋成均勻乳劑，-20℃反復(fù)凍融3次以上。

2 . DNA的抽提

(1) 取已凍融好的病料，8000r/min離心5min，取上清500μl（或質(zhì)控樣品T，500μl），加50μl SR-I和6μl SR-II，50℃水浴1～2h，并不時(shí)顛倒混勻一下；

(2) 加入等量酚：氯仿（1：1），漩渦振蕩20秒，4℃，12000r/min，離心5min；

(3) 取上清，加入等量氯仿，振蕩混勻，4℃，12000r/min，離心5min；

(4) 取400μl上清，加入800μl無水乙醇，再加40μl SR-III,混勻。-20℃放置30~60min，4℃、12000r/min，離心10min，小心棄上清，沉淀即為DNA。用75%乙醇（滅菌雙蒸水配，每次加入500μl）洗滌2次，小心吸去75%乙醇，勿使DNA丟失，室溫晾干或超凈工作臺風(fēng)干15-25min，加入20μlTU-5溶解即為模板，即用或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.PCR操作

 3.PCR操作

 4.電泳

 4.電泳：

   稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲存?zhèn)溆茫?，于微波爐中熔解，加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物6μl混合1.5μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加入3μlTU-8，在100v 電壓下，1×TAE液中電泳30分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

    在220bp位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性

豬偽狂犬病PCR診斷試劑盒

【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。

3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。