上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: PCR檢測(cè)試劑盒, ELISA試劑盒, 科研抗體, ATCC細(xì)胞, 菌種, 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
A7r5-大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
價(jià)格
訂貨量(株)
¥2800.00
≥1
店鋪主推品 熱銷潛力款
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所在地區(qū)
上海市閔行區(qū)
主營(yíng)產(chǎn)品
PCR檢測(cè)試劑盒, ELISA試劑盒, 科研抗體, ATCC細(xì)胞, 菌種, 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息:
產(chǎn)品名稱:A7r5 大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
英文名稱:A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells
規(guī)格:5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號(hào):BH-C3004
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
運(yùn)輸和保存:
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作;每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70%ethanol擦拭無菌操作抬面;
操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作;無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作;
小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無菌操作臺(tái)(至少ClassⅡ)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Mad2L2 有絲分裂阻滯缺陷2樣蛋白2抗體
Monoamine Oxidase B 單胺氧化酶B抗體
MCM4 微小染色體維持缺陷蛋白4抗體
MAP1LC3A 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體
MRF/C11orf9 髓鞘基因調(diào)控因子抗體
MYBPC1 肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體
Phospho-MKP1 (Ser318) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶1抗體
Metabotropic glutamate receptor 2 促代謝型谷氨酸受體2抗體
MGLUR3 代謝型谷氨酸受體-3抗體
CXCL2 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2( GROβ)抗體
Metallothionein 金屬硫蛋白抗體
Phospho-MAP2(Ser136) 磷酸化微管相關(guān)蛋白2抗體
MMRN1 內(nèi)皮細(xì)胞MMRN1蛋白抗體
Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)EPHB2重組人 EphB2 / Hek5 蛋白 (aa 570-987, His & GST 標(biāo)簽) Protein VEGFA重組人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白 Protein NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD) Protein USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein C7重組人 C7 / Complement component 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein RPS6KB1重組人 PS6K / RPS6KB1 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein CXCL5重組人 CXCL5 蛋白 Protein B3GNT2重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein 重組人 SLITRK6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ABHD14B重組人 ABHD14B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein