小鼠-末端補體復合物C5b-9(TCC-C5b-9)ELISA試劑盒說明書價格優(yōu)惠
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小鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒說明書價格優(yōu)惠
規(guī) 格:96T/48T
品牌:TSZ,IBL,R&D等國內外知名品牌
貯藏條件:2-8℃,避光保存
有效期:6個月
產品的用途:僅供科研究使用!
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好、吸附性能強、因操作簡便,已廣泛應用于免疫學檢驗檢測。
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基本原理
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,*結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體
②酶標記的抗原或抗體
③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
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注意事項
⒈ 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
⒉ 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
⑴ 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
⑵ 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值*而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
⑶ 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
⑷ 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
小鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒說明書價格優(yōu)惠注意事項:
在收集標本前必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成分是否足夠穩(wěn)定,我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,請及時儲存在4℃的條件下備用,如有特殊原因需要周期手機標本,請在造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保持。因冰室與室溫存在一定的溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以請避免反復凍融。有代測需求的客戶,取材前請務必和我司銷售人員索要說明書,具體操作事項請與我司技術人員保持聯(lián)系。
液體類標本:
包括血清,血漿,尿液,胸腹水,腦脊液,細胞培養(yǎng)上清液等。
血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如保存過程中如有沉淀,請再次離心。
血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,在離心20分鐘(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如保存過程中有沉淀,請再次離心。
尿液:
用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如保存過程中有沉淀,請再次離心。
細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,當細胞濃度達到100萬/ml左右,通過反復凍融,使細胞破壞并釋放細胞內的成份,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如保存過程中有沉淀,請再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量,加入一定量的PBS(PH7.4),用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?,標本融化后仍保?-8℃的溫度,加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,分裝后留一份待檢測,其余冷凍備用。
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