凝血酶和肝素輔因子Ⅱ是人體凝血及抗凝血系統(tǒng)中的重要組成部分。肝素輔因子Ⅱ在有肝素或硫酸皮膚素催化時,可迅速抑制凝血酶活性。研究肝素輔因子Ⅱ與凝血酶相互作用的分子機制有助于發(fā)現(xiàn)或設(shè)計出對血栓性疾病治療有效的凝血酶拮抗劑,對血栓性疾病的預防和治療提供新手段和帶來新希望。

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)水平。用純化的犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ))抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ),再與HRP標記的肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)濃度。

研究人黃素化顆粒細胞中肝素結(jié)合表皮生長因子(HB-EGF)的表達特點.方法:收集體外受精-胚胎移植過程中的人黃素化顆粒細胞進行體外培養(yǎng);應用RT-PCR法和免疫細胞化學法分別檢測HB-EGF的mRNA和蛋白表達;應用實時RT-PCR法檢測HB-EGFmRNA量的變化。結(jié)果:人黃素化顆粒細胞中存在HB-EGF的mRNA和蛋白表達。培養(yǎng)基中加入重組HB-EGF后,HB-EGF mRNA的表達量迅速上升,2 h內(nèi)達高峰,然后回落,于12 h內(nèi)降至處理前水平.結(jié)論:人黃素化顆粒細胞中存在HB-EGF的表達;人黃素化顆粒細胞中的HB-EGF可能是瞬時早期反應基因。