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主營產品: elisa試劑盒
大鼠(DAP6)ELISA試劑盒廠家-高靈敏DAP6檢測試劑盒
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大鼠(DAP6)ELISA試劑盒廠家-高靈敏DAP6檢測試劑盒
在下面列出的基質中加入一定水平的DAP6,并通過將測量值與樣品中DAP6的預期量進行比較來計算回收率。
矩陣 | 回收率% | 平均(%) |
---|---|---|
血清(n = 5) | 87-102 | 94 |
EDTA血漿(n = 5) | 86-105 | 95 |
肝素血漿(n = 5) | 94-103 | 99 |
通過測試摻有適當濃度的DAP6的樣品及其系列稀釋液,可以測定試劑盒的線性。通過計算濃度相對于預期濃度的百分比來證明結果。
樣品 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
---|---|---|---|---|
血清(n = 5) | 89-103% | 86-100% | 86-103% | 89-103% |
EDTA血漿(n = 5) | 82-92% | 93-100% | 83-97% | 83-90% |
肝素血漿(n = 5) | 83-99% | 82-95% | 87-97% | 85-98% |
批間分析:CV <10%
實驗需準備的 材料設備
1、酶標儀
2、移液器及槍頭
3、洗板機
4、試管、離心管、量筒等
5、蒸餾水或去離子水
6、電熱恒溫箱
液體樣本的收集
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
7、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動,來回輕輕顛倒數次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
固體樣本的收集
1、組織標本:切割標本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨。
2、細胞內蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細胞
A、動物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
B、植物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎 2s,冷卻 30s 的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)組織的細胞
切割標本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分),去除上清,再用 pH7.2-7.4左右的 PBS 小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
3、細胞內蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
4、咽拭子:加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
5、植物標本:取組織塊(0.2g~0.5g)最少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放入 5ml 的勻漿管中;按重量(mg):體積(ml)=1:9 的比例加入 9 倍體積的勻漿介質于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊;勻漿的方式:手工勻漿,機器勻漿。 ① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8 分鐘),充分研碎,制成 20%的勻漿液。 ② 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000 轉/分 上下研磨制成 10%組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續(xù) 3~5 次,在冰水中進行,可適當延長勻漿時間),鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。將制備好的 10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機 4000 轉/分左右,離心 10~15 分鐘,取上清液進行測定。