RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer)     C1053

 

描述： RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng)典和最常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPA 裂解緩沖液制備用于Western特別是用于免疫共沉淀的裂解產(chǎn)物已經(jīng)是一種首選的標(biāo)準(zhǔn)操作，也適用于大部分抗原表位檢測(cè)，特別是免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)。

 

組成： 100 ml  RIPA裂解緩沖液。

成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

 

儲(chǔ)存：4 ℃保存  12個(gè)月有效

 

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1.         800g  4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 ml, 10⁷ cells =~100 ml PCV）；

2.         每50～100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250~500 ml）,冰浴放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3.         12000g  4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，再進(jìn)行步驟3

 

制備組織裂解產(chǎn)物：

1.         取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.         加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；

3.         4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4.         12000g  4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物。

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，再進(jìn)行步驟4

 

說(shuō)明：

1.         轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2.         在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白提取，避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.         RIPA裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇添加。

 

使用我司RIPA裂解緩沖液發(fā)表SCI論文已達(dá)數(shù)百篇，部分文章列表如下，供參考：

1、Corporation H P. Secernin-1 Contributes to Colon Cancer Progression through Enhancing Matrix Metalloproteinase-2/9 Exocytosis.[J]. Disease Markers, 2015.

2、Corporation H P. Cytotoxic Effects of Biosynthesized Zinc Oxide Nanoparticles on Murine Cell Lines[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine : ECAM, 2015, 2015.

3、Corporation H P. Protective effects of N-acetylcysteine in concanavalin a-induced hepatitis in mice.[J]. Mediators Inflamm, 2015.

4、Corporation H P. Blockade of lysosomal acid ceramidase induces GluN2B-dependent Tau phosphorylation in rat hippocampal slices.[J]. Neural Plasticity, 2014,

5、J. V, T. P, Y. L, et al. Androgen Receptor Activation[J]. Cellular Physiology & Biochemistry, 2014, 33(6):1911-1920.

6、Yang K, Song Y, Tang Y, et al. mAChRs activation induces epithelial-mesenchymal transition on lung epithelial cells.[J]. Bmc Pulmonary Medicine, 2014, 14(4):417-419.

7、Peng Y, Guo J, Liu Y, et al. MicroRNA-34A inhibits the growth, invasion and metastasis of gastric cancer by targeting PDGFR and MET expression[J]. Bioscience Reports, 2014, 34(2):247-256.

8、Lee S Y. Nonthermal plasma induces apoptosis in ATC cells: involvement of JNK and p38 MAPK-dependent ROS.[J]. Yonsei Medical Journal, 2014, 55(6).

9、Jeong J, Conboy M J, Conboy I M. Pharmacological inhibition of myostatin/TGF-β receptor/pSmad3 signaling rescues muscle regenerative responses in mouse model of type 1 diabetes[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2013, 34:1052-1060.

10、Vaziri N D, Yuan J, Nazertehrani S, et al. Chronic Kidney Disease Causes Disruption of Gastric and Small Intestinal Epithelial Tight Junction.[J]. American Journal of Nephrology, 2013, 38(2):99-103.

11、Li Y, Sun Y, Liu F, et al. Norcantharidin Inhibits Renal Interstitial Fibrosis by Blocking the Tubular Epithelial-Mesenchymal Transition[J]. Plos One, 2013, 8(6):e66356.

12、Kashyap M, Kawamorita N, Tyagi V, et al. Down-regulation of nerve growth factor expression in the bladder by antisense oligonucleotides as new treatment for overactive bladder.[J]. Journal of Urology, 2013, 190(2):757-764.

13、Tisdell, Francis E, et al. "3-(substituted phenyl)-5-(substituted cyclopropyl)-1,2,4-triazole compounds." US, US 6262099 B1. 2001.