Western及IP裂解液   C1054

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價格
C1054-100	Western及IP裂解液	100ml	150元
C1054-500	Western及IP裂解液	500ml	720元

  

 

描述：Western及IP裂解緩沖液，為您提供完整的組織、細(xì)胞總蛋白制備方案。

Western及IP裂解緩沖液(C1054)能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白等等。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合能力或酶學(xué)活性，因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。

 

儲存：4℃保存

 

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1.         800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，而后用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次。估計細(xì)胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 ml, 10⁷ cells =~100 ml PCV）；

2.         每50～100 ml PCV加入5倍體積IP裂解緩沖液（250~500 ml）,渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

3.         12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物，

 

制備組織裂解產(chǎn)物：

1.         取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.         加入 0.5-1 ml 預(yù)冷的IP裂解緩沖液；

3.         4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

4.         12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物，可用于后續(xù)的免疫沉淀或者Western Blot等實驗。

 

注意：

1.         在轉(zhuǎn)移上清液時不要吸入底部的沉淀物；

2.         在做免疫沉淀或免疫共沉淀時最好在實驗前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.         在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進(jìn)行添加。