蛋白印跡膜再生液/膜再生液/抗體剝離液體/一抗二抗去除液

描述：

膜再生液，也稱做抗體剝離液體、一抗二抗去除液。允許對(duì)同一張膜進(jìn)行多次Western Blot檢測(cè)。在室溫條件下，將用過(guò)的膜浸泡在膜再生液中30分鐘，能夠選擇性清除與膜抗原結(jié)合的第一抗體及第二抗體，但不影響電轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白。隨后可以使用不同的抗體進(jìn)行下一輪Western Blot實(shí)驗(yàn)，可利用同一張膜進(jìn)行多次蛋白檢測(cè)。不僅適宜用少量樣品多次檢測(cè)多種不同蛋白，即使樣品量并不匱乏，采用這種多次檢測(cè)同一張膜上的蛋白的策略，能省去給藥處理、蛋白電泳和膜轉(zhuǎn)移等耗費(fèi)性步驟。

特點(diǎn)：

（1）無(wú)毒無(wú)味無(wú)害，室溫保存和使用；

（2）可對(duì)同一張膜進(jìn)行10次以上的Western Blot檢測(cè)。

適用：

硝酸纖維素膜或PVDF膜。使用前膜可以保存在PBS或TBS緩沖液，也可以室溫干燥保存數(shù)月。

干的PVDF膜應(yīng)該先用甲醇泡5分鐘。

安全性：

無(wú)毒無(wú)味。按照普通化學(xué)品安全規(guī)范進(jìn)行操作和處置。

儲(chǔ)存：

室溫保存，一年有效。溫度過(guò)低可能出現(xiàn)渾濁。

效果展示：

第一次Western Blot                  第一次Western Blot后用膜再生液處理，然后進(jìn)行第二次Western Blot

操作步驟：

1. 將膜充分浸泡于適當(dāng)體積的再生液中，室溫孵育15~30分鐘并不時(shí)晃動(dòng)。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短應(yīng)參考后面的說(shuō)明進(jìn)行優(yōu)化。洗脫某些抗體需要較長(zhǎng)的時(shí)間如30~60分鐘。

2. 用鑷子取出膜，用自備Western Blot洗滌緩沖液或普利萊封閉洗滌緩沖液（B1009）淋洗膜一次，再洗膜5分鐘。

3. 此時(shí)膜上抗體已去除，膜已再生。用脫脂奶粉或BSA封閉，進(jìn)行下一輪Western Blot實(shí)驗(yàn)。

說(shuō)明:

1. 膜再生或Stripping的實(shí)質(zhì)是在不影響膜上結(jié)合的抗原的條件下，將與抗原分子結(jié)合的一抗和二抗洗脫下來(lái)。有許多因素影響抗體從膜上的洗脫，如膜的類型、抗體類型和濃度及其與抗原結(jié)合特性等。按下面的說(shuō)明優(yōu)化再生液中孵育膜的時(shí)間至關(guān)重要。

2. 確定膜上抗體是否去除與優(yōu)化再生液中孵育膜的時(shí)間：用ECL工作液孵育再生后的膜約1分鐘，然后進(jìn)行X光膠片曝光并顯影，可確定膜上的抗體是否完全去除。如顯示條帶，表明抗體未完全去除，應(yīng)繼續(xù)將膜浸泡在再生液中孵育30~60分鐘。然后再次ECL 檢查膜上抗體是否去除。重復(fù)此步驟直到抗體完全去除并確定最佳孵育時(shí)間。

3. 由于至今尚不清楚的原因，使用脫脂奶粉封閉的膜要比使用BSA封閉的膜上的抗體更容易被Strip下來(lái)。因此準(zhǔn)備進(jìn)行Strip的膜，應(yīng)該使用脫脂奶粉而不是BSA封閉。

4. 盡量避免使用干燥保存的膜，因?yàn)?/span>干的膜上的抗體很難被Strip干凈。