實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：志賀氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：Shigella spp.

貨號: GOY-M4483

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設(shè)置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-Amino-1-methyluracil  2434-53-9  中文名：  分子式：C5H7N3O2 

兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2  度：98.0%

兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3  度：98.0%

兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  6972-78-7  中文名：  分子式：C5H6N4O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3

2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  中文名：  分子式：C5H4N2O4  度：98.0%  兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2  度：98.0%  兔子氧化低密度脂蛋白elisa試劑盒   兔子氧化低密度脂蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子氧化低密度脂蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子氧化低密度脂蛋白試劑盒、兔子氧化低密度脂蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Metoclopramide  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2  度：98.0%  兔子血小板因子4elisa試劑盒   兔子血小板因子4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子血小板因子4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子血小板因子4試劑盒、兔子血小板因子4eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Amiodarone hydrochloride  中文名：鹽酸胺酮  分子式：C25H30ClI2NO3  度：98.0%  兔子血小板衍生生長因子elisa試劑盒   兔子血小板衍生生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子血小板衍生生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子血小板衍生生長因子試劑盒、兔子血小板衍生生長因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Zidovudine  中文名：齊多夫定  分子式：C10H13N5O4  度：98.0%  兔子血小板活化因子elisa試劑盒   兔子血小板活化因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子血小板活化因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子血小板活化因子試劑盒、兔子血小板活化因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。小鼠類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-2   英文名稱：   insulin-like growth factors binding protein-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IGFBP-2  Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  24922-02-9  中文名：  分子式：C8H12O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1(mouse IGFBP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate  中文名：  分子式：C12H14N2O4S  度：98.0%

小鼠類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1   英文名稱：   insulin-like growth factors binding protein-1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IGFBP-1  Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  中文名：  分子式：C8H12O3 

小鼠類胰島素生長因子-2   英文名稱：   Insulin like Growth Factor 1 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IGF-2  Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  中文名：  分子式：C8H12O3  度：98.0%

小鼠類胰島素生長因子-1(mouse IGF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     D-arabinitol  中文名：  分子式：C5H12O5

志賀氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Formestane  中文名：福美司坦  分子式：C19H26O3  度：98.0%  小鼠IgG(mouse IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

4-Chlorotestosterone acetate  中文名：醋酸氯睪酮  分子式：C21H29ClO3  度：98.0%  小鼠IgM(mouse IgM)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Estra-4,9-diene-3,17-dione  中文名：甲基雙烯雙酮  分子式：C18H22O2  度：98.0%  小鼠白介素-1a(mouse IL-1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Methoxydienone  中文名：沃氏物  分子式：C20H28O2  度：98.0%  小鼠白介素-1b(mouse IL-1b)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

Methasterone  中文名：甲基屈他雄酮  分子式：C21H34O2  度：98.0%  小鼠IgE   英文名稱：    immunoglobulin E   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgE

服務(wù)流程：

志賀氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）