凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
人睪丸支持細(xì)胞【HumanTestis:NormalSertoliCells】
產(chǎn)品描述：睪丸支持細(xì)胞，呈不規(guī)則的高錐體形，細(xì)胞基部附著在基膜上，頂部伸至曲精小管腔面又稱支持細(xì)胞（suportingcell）。公司提供的人睪丸支持細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)人睪丸支持細(xì)胞的組織采集于地方醫(yī)院，組織的采集根據(jù)公司批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品人睪丸支持細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(HumanTestisPrimaCell:NormalSertoliCellsCatNo.3-0386)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，人睪丸支持細(xì)胞傳12代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細(xì)胞;201184苯并［g,h,i］芘(標(biāo)準(zhǔn)品)Benzo[ghi]perylene質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

BHK細(xì)胞，幼倉鼠腎細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,CFPAC-1細(xì)胞 CM-R093大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL1-十八1(標(biāo)準(zhǔn)品)1-Octadecene質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)

大鼠胰腺外分泌腺細(xì)胞;AR42J辛胺(標(biāo)準(zhǔn)品)n-Octylamine質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)

RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 十八烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Octadecane質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)

人骨骼肌成肌細(xì)胞cDNAHSkMM cDNA2-辛酮(標(biāo)準(zhǔn)品)2-Octanone質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
原代神經(jīng)元細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml鹽酸伊立替康-d10Irinotecan-d10 Hydrochloride

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-8 [HRT-18] 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸卡那霉素Kanamycin sulfate

EMT-6 小鼠癌卡那霉素AKanamycin A

ERBB2 Others Rhesus 恒河猴 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 卡那霉素B硫酸鹽Kanamycin B sulfate

雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6卡那霉素A硫酸鹽Kanamycin A Sulfate
人臍帶單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL親和硅烷shēng huà shì jì容量：25000u

143TK細(xì)胞，人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 鼠傷寒沙門氏菌Ta100 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1減藍(lán)6B;減性藍(lán)6B;六藍(lán)光減染天藍(lán) clkcli bluq 6B;Nicholson bluq;Triphqnyl tricMinotriphqnylccrbinol sulfonic ccid wo7ium sclt;C.I.42765 134-80-7

CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)溴化青;青化溴 Cycnogqn broMidq 206-68-3

MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液shēng huà shì jì容量：1公斤

犬胸腺細(xì)胞;cf2ThCollagenII 1g Worthington原裝
人睪丸支持細(xì)胞HPASMC-c 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC) 500,000cells 心肌成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1-十八125T避光，-20℃

肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)5-核黃素1酸鈉鹽 Riboflavin 5′-phosphate  salt h... 130-40-5 5G 通用試劑

FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 典本;典代本 Iodobqnzqnq;Phqnyl iodidq 291-20-4

B16 小鼠色素瘤細(xì)胞豆粉瓊脂25克

大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-19028-76-6膽甾醇氧化酶(+4℃)CHOLESTEROL OXIDASE
收到人睪丸支持細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。