上海一研生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測(cè)試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
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上海市閔行區(qū)
主營(yíng)產(chǎn)品
準(zhǔn)備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 | Bovine Rhinitis Virus (BRV) RTPCR | 50T |
普通PCR反應(yīng)流程:
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
反應(yīng)五要素:
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用方法 :
1 實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑
1.1 器材
1)PCR儀
2)PCR反應(yīng)管
3)電泳儀及水平電泳槽
4)高速離心機(jī)
5)微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1)瓊脂糖
2)EB(溴化乙錠)
3)去離子水或雙蒸水
注意事項(xiàng):
5.1使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
5.2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說(shuō)話,因口腔中也含有支原體,可能引起樣品污染,而造成假陽(yáng)性;整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中,反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行,以避免交叉污染。 5.3 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻(混勻時(shí)禁止激烈振蕩,只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻)。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后,應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增,以免形成過(guò)多的二聚體。
5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度,建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè)。
隱丹參酮 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Magnoflorine
隱綠原酸(4-咖啡??鼘幩幔?現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Magnoflorine iodide
鷹嘴豆芽素A 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Higenamine hydrochloride
柚皮甙二氫查爾酮 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Higenamine hydrochloride
柚皮苷 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Columbianetin
柚皮素 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Eupatilin
右旋比扣扣靈堿 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Rimonabant carboxylic acid
右旋四氫巴馬汀 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Zeaxanthin
羽扇豆醇 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Triethylenethiophosphoramide
育亨賓 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Pramipexole Base
鳶尾黃素 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Pramipexole Base
原阿片堿 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Genistein
原兒茶醛 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Genistein
原兒茶酸 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Luteolin
原花青素B1 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Luteolin
原花青素B2 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Ursolic acid
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒人免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Echinocystic acid 25G
人美洲商陸素(PWM)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) hypaphorine;tryptophan betaine 1G
人美麗線蟲(chóng)凋亡基因(CED-3)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) Eleutheroside D 10G
人錨蛋白B(Ank-B)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Eleutheroside E 1g
人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因(ATM)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Ciwujianoside B 100mg
人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Cantleyoside 1g
人麻疹病毒IgM(MV IgM)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Gossypol acetic acid 1g
人麻疹病毒(MV)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Plantamajoside 100mg