產(chǎn)品名稱：人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT 

產(chǎn)品規(guī)格：96T（人份）/48T（人份）（單孔檢測分別可以檢測90份樣本，42分樣本，一般都需要留6個孔做標(biāo)準(zhǔn)曲線）。

檢測方法：酶聯(lián)免疫分析ELISA方法

有效期： 6個月(4℃)；

保存方法： 2-8℃

品牌：子科生物ZIKER

質(zhì)量保證：我告訴所有產(chǎn)品均需要經(jīng)過質(zhì)檢通過后，才允許出庫！

適用范圍：實驗結(jié)果僅供科研參考，不推薦用于臨床診斷結(jié)果。

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等，子科生物ELISA產(chǎn)品主要用雙抗體夾心法。

標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

產(chǎn)品性能：靈敏度高，特異性強，重復(fù)性。

產(chǎn)品包裝：盒（KIT）（含試劑+酶聯(lián)板+覆膜等）

檢測范圍：詳細(xì)請咨詢在線客服或撥打銷售蘇經(jīng)理。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

實驗原理：

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

標(biāo)本的采集及保存

1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過了夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會影響*檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。

標(biāo)本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。*計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。

如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒操作步驟

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

結(jié)果判定：

子科生物所供ELISA試劑盒結(jié)果判定一般分定性測定和定量測定兩種：

1、定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的*稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

2、定量測定

ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線*點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。

測定小分子量物質(zhì)常用競爭其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示例見圖注意圖中橫坐標(biāo)為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒

ZK-H574人苯丙氨酸羥化酶(PAH)ELISA檢測試劑盒human Phenylalanine Hydroxylase (PAH) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H575人異亮氨酰tRNA合成酶(IARS)ELISA檢測試劑盒human Isoleucyl tRNA Synthetase (IARS) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H576人S-期激酶關(guān)聯(lián)蛋白1(SKP1)ELISA檢測試劑盒human S-Phase Kinase Associated Protein 1 (SKP1) ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H577人細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA檢測試劑盒Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H578人脂聯(lián)素（ADP）ELISA檢測試劑盒Human adiponectin,ADP ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H579人脂氧素A4（LXA4）ELISA檢測試劑盒Human Lipoxin A4,LXA4 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H580人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A（MICA）ELISA檢測試劑盒Human MICA  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H581人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因B（MICB）ELISA檢測試劑盒Human MICB  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H582人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因D（MICD）ELISA檢測試劑盒Human MICD  ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H583人脂多糖（LPS）ELISA檢測試劑盒Human Lipopolysaccharides,LPS ELISA kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H584人糖連抗原199（CA199）ELISA檢測試劑盒Human CA199   ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H585人糖連抗原153（CA153）ELISA檢測試劑盒Human CA153   ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H586人組織因子途徑抑制物（TFPI）ELISA檢測試劑盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H587人組織多肽抗原（TPA）ELISA檢測試劑盒Human Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H588人組織因子（TF）ELISA檢測試劑盒Human Tissue factor,IF ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H589人組織相容性2-K1-K區(qū)（H2-K1）ELISA檢測試劑盒human Histocompatibility 2-K1-K region,H2-K1 ELISA Kit酶聯(lián)免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

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