大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物（tat）elisa試劑盒

品牌：子科生物ziker，美國(guó)r&d,美國(guó)immonoway,美國(guó)sciencell,德國(guó)ibl

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●標(biāo)本的采集及保存：

1．血清：標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．血漿：可用edta或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8℃1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物（tat）elisa試劑盒

●操作步驟

各試劑在使用前平衡至室溫。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul，注意不要有氣泡，輕輕混勻，酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)120分鐘。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。

3. 每孔加檢測(cè)溶液a工作液 100ul，37℃,60分鐘。洗板3次，350ul/每孔，甩干。

4. 每孔加檢測(cè)溶液b工作液 100ul，37℃，60分鐘，洗板5次，甩干。

5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘(此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯)。

6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)(此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色)。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(od值)。

●注意：1．每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是*加底物溶液及2nh2so4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)od值至零。

      2．為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。

大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物（tat）elisa試劑盒

●洗板方法：

手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

●計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，od值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo))，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的od值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與od值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

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