白細胞裂解液

產品及特點 本產品為即用型白細胞裂解溶液，可以用于裂解分離純化好的血液白細胞，用于 DNA 提取、RNA 提取等后續(xù)實驗。
規(guī)格及成分 成份 編號 大立盒包裝
白細胞裂解液 KL083215 250 mL
使用手冊 KL083215 1 份
運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。
自備試劑 Tris 飽和酚、氯仿、乙酸鈉溶液、乙醇、TE 緩沖液等

使用方法 下面以 DNA 提取為例：
1. 取新鮮抗凝血 5 mL，在 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中用紅細胞裂解液裂解紅細胞（紅細胞裂解液有幾種配方，用戶需要根據所選產品的使用手冊進行操作，這里不列出每種的詳細步驟），也可以直接 2500rpm 離心 5 分鐘后取白細胞層到一新的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中。
2. 在所得的白細胞沉淀中或所得白細胞層溶液中加自備的生理鹽水使得白細胞的終體積為 2mL。
3. 加 1 mL 的本產品，混勻后 55℃ 保溫 3 小時，其間輕輕振搖數(shù)次。
4. 加入 3 mL 自備的 Tris 飽和酚，輕輕震搖 5 分鐘，使得水相和酚相充分分開。
5. 3500 rpm 離心 15 分鐘，上層水相含 DNA，中間白色層為蛋白質，下層為酚相。
6. 將非常粘稠的含 DNA 的上清液轉移到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中。
7. 再用 Tris 飽和酚重復上面的抽提步驟，直到離心后中間層沒有白色的蛋白出現(xiàn)為止。
8. 在上清液中加入等體積的自備的氯仿，輕輕震搖 5 分鐘，3500 rpm 離心 5 分鐘，轉移上清液到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中。此步可以除去殘留的酚。
9. 在上清液中加入 0.1 倍體積的自備的 3 M 乙酸鈉溶液（pH 5.2）和 2倍體積的無水乙醇，輕柔顛倒混勻，將出現(xiàn)絮狀的 DNA 沉淀。
10. 用移液槍頭將 DNA 沉淀挑取出來，轉移到 1.5 mL 的塑料離心管中，用 75%的乙醇浸泡 2 次。此操作可以去除 DNA 中殘留的鹽離子。
11. 轉移 DNA 沉淀到一個 1.5 mL 的塑料離心管中，空氣中放置 10 分鐘左右待乙醇揮發(fā)后，加入 0.5 mL 自備的 TE 緩沖液溶解 DNA，4℃放置待用。